Методы исследования в цитологии
Категория реферата: Рефераты по биологии
Теги реферата: презентация дипломной работы, реферат газ
Добавил(а) на сайт: Фламин.
Предыдущая страница реферата | 1 2
Радиоавтография имела и имеет до сих пор очень широкое применение для изучения того, где и как в организме протекают те или иные биохимические реакции.
Химические соединения, меченые радиоактивными изотопами, которые используются для исследования биологических процессов, называют предшественниками. Предшественники – это обычно вещества, подобные тем, которые организм получает из пищи; они служат строительными блоками для построения тканей и включаются в сложные компоненты клеток и тканей таким же образом, как в них включаются немеченые строительные блоки. Компонент ткани, в который включается меченый предшественник и который испускает излучение, называется продуктом.
Клетки, выращиваемые в культуре, хотя и принадлежат к одному и тому же типу, в любой данный момент времени будут находиться на разных стадиях клеточного цикла, если не принять специальных мер для синхронизации их циклов. Тем не менее, путем введения в клетки тритий-тимидина и последующего изготовления радиоавтографов можно определить продолжительность различных стадий цикла. Время наступления одной стадии – митоза – можно определить и без меченого тимидина. Для этого выборку клеток из культуры держат под наблюдением в фазово-контрастном микроскопе, который дает возможность непосредственно следить за течением митоза и устанавливать его сроки. Продолжительность митоза обычно равна 1 ч, хотя в клетках некоторых типов он занимает до 1.5 ч.
Определение продолжительности G 2-периода.
Для определения продолжительности G 2–периода применяют метод, известный под названием импульсной метки: к культуре клеток добавляют меченый тимидин, а спустя короткое время заменяют культуральную среду свежей, с тем, чтобы предотвратить дальнейшее поглощение клетками меченого тимидина. При этом метку включают только в те клетки, которые в течение кратковременного пребывания в среде с тритий-тимидином находились в S- периоде клеточного цикла. Доля таких клеток невелика и лишь небольшая часть клеток получит метку. Кроме того, все клетки, включающие метку, будут находиться в интерфазе – от клеток, едва вступивших в S-период, до таких, которые почти закончили его за время воздействия тритий-тимидина. В пробе, взятой сразу после удаления меченого тимидина, метка содержится только в интерфазных ядрах, принадлежащих клеткам, которые в период воздействия метки находились в S-периоде; те же клетки, которые в этот период находились в состоянии митоза, остаются немечеными.
Если затем продолжать отбирать из культуры пробы через определенные промежутки времени и изготовлять для каждой последовательной пробы радиоавтограф, то наступит момент, когда метка начнет появляться в митотических d-хромосомах. Метки будут включаться во все те клетки, которые в период наличия в среде тритий-тимидина находились в S-периоде, причем среди этих клеток будут как только что вступившие в S-период, так и почти закончившие его. Совершенно очевидно, что эти последние первыми среди меченых клеток проделают митоз и, следовательно, в их митотических хромосомах обнаружится метка. Тем самым промежуток между 1) временем, когда из культуры был удален меченый тимидин, и 2) временем появления меченых митотических хромосом будет соответствовать продолжительности G 2–периода клеточного цикла.
Определение продолжительности S-периода.
Поскольку клетки, находящиеся в момент введения в среду метки в самом
конце S-периода, первыми вступят в митоз, то, следовательно, в тех клетках, у которых S-период начинается непосредственно перед удалением метки, меченые митотические хромосомы появятся в последнюю очередь. Поэтому, если
бы нам удалось определить промежуток между временем вступления в митоз
клеток, помеченных первыми, и клеток, помеченных последними, мы установили
бы продолжительность S-периода. Однако, хотя время, когда впервые
появляются меченые митотические хромосомы, установить легко, время
вступления в митоз клеток, помеченных последними, определить невозможно
(этому препятствует очень большое количество меченых делящихся клеток в
последних пробах). Поэтому продолжительность S-периода приходится
определять другим способом.
При исследовании радиоавтографов последовательных проб клеток, отбираемых через одинаковые промежутки времени, обнаруживается, что доля
клеток, несущих метку в своих митотических хромосомах, постепенно
возрастает, пока мечеными не окажутся буквально все делящиеся клетки.
Однако, по мере того как клетки одна за другой завершают митоз, они
превращаются в меченые интерфазные клетки. Первыми завершают митоз те из
меченых клеток, которые вступили в него первыми; и соответственно из клеток
с мечеными митотическими хромосомами последними завершают митоз те, которые
вступили в него позже всех. Поскольку продолжительность митоза всегда
одинакова, то, следовательно, если бы мы могли определить промежуток между:
1) временем окончания митоза в клетках, включивших метку первыми, и 2)
временем окончания митоза в клетках, включивших метку последними, мы
установили бы продолжительность S-периода. Продолжительность S-периода
нетрудно установить, определив промежуток между: 1) моментом времени, когда
50% митотических клеток в культуре несут метку, и 2) моментом времени, после которого культура уже не содержит 50% меченых клеток.
Определение времени генерации (общей продолжительности всего клеточного цикла).
Продолжая отбирать из культуры пробы клеток, можно обнаружить, что
меченые фигуры митоза в какой-то момент совершенно исчезают, а затем
появляются вновь. Такие делящиеся клетки представляют собой дочерние
клетки, происходящие от тех материнских клеток, которые включили метку, находясь в момент воздействия тритий-тимидина в S-периоде. Эти материнские
клетки перешли в S-период, разделились, а затем прошли через вторую
интерфазу и второе деление, то есть проделали один полный цикл и часть
следующего. Время, необходимое для прохождения полного клеточного цикла, называется временем генерации. Оно соответствует промежутку между двумя
последовательными пиками включения метки и обычно соответствует отрезку
между теми точками последовательных восходящих кривых, в которых 50% фигур
митоза содержат метку.
Литература.
А.Хэм, Д.Кормак «Гистология», том 1 Москва «МИР» 1982;
М.Г.Абрамов «Клиническая цитология» Москва «МЕДИЦИНА» 1974;
Ю.С.Ченцов «Общая цитология»
Скачали данный реферат: Fedotov, Modzalevskij, Hristiana, Haritonov, Глинка, Подкользин.
Последние просмотренные рефераты на тему: курсовики скачать бесплатно, решебник виленкин, экология реферат, век реферат.
Предыдущая страница реферата | 1 2